Técnicas microbiológicas para identificação de coliformes em água | Microbiological techniques for the identification of coliforms in water
A avaliação da qualidade microbiológica da água depende da aplicação de métodos capazes de detectar e quantificar coliformes totais, coliformes termotolerantes e Escherichia coli. A escolha da técnica varia conforme o tipo de amostra, carga microbiana esperada e o objetivo da análise (controle operacional, monitoramento ambiental ou atendimento à legislação). Os métodos mais utilizados incluem a filtração por membrana, o número mais provável (NMP), a técnica de presença/ausência e o método de substrato enzimático.
Filtração por membrana: é amplamente aplicada em análises de água devido à sua alta sensibilidade e possibilidade de quantificação direta das bactérias. São utilizados diferentes meios de cultura para a quantificação destas bactérias dependendo o tipo de matriz e o tipo de bactéria que se deseja identificar.
Técnica do número mais provável (NMP): é um método microbiológico utilizado para estimar a concentração de bactérias em uma amostra. O procedimento consiste na inoculação de volumes decrescentes da amostra em séries de tubos contendo meios seletivos apropriados. Com base nos resultados, a concentração bacteriana é determinada por meio de tabelas estatísticas padronizadas, disponíveis em normas técnicas.
Teste de presença/ausência (PA): é um método qualitativo, que indica apenas se há ou não coliformes em um determinado volume de amostra. A amostra é inoculada em um meio seletivo que permite o crescimento de coliformes, geralmente com indicação visual de positividade por turvação ou mudança de cor.
Método de substrato enzimático: é frequentemente utilizado para análises de água potável. Baseia-se na detecção de enzimas específicas produzidas pelas bactérias: β-galactosidase que indica coliformes totais e β-glucuronidase que indica Escherichia coli. A reação do substrato resulta em mudança de cor e/ou fluorescência sob luz UV, permitindo a identificação dos microrganismos.
Autora:
Thaynara Morgana Marin - Gestora técnica no Freitag Laboratórios
IN ENGLISH
The assessment of the microbiological quality of water depends on the application of methods capable of detecting and quantifying total coliforms, thermotolerant coliforms, and Escherichia coli. The choice of technique varies according to the type of sample, the expected microbial load, and the objective of the analysis (operational control, environmental monitoring, or regulatory compliance). The most commonly used methods include membrane filtration, the most probable number (MPN), the presence/absence technique, and the enzyme substrate method.
Membrane filtration: This method is widely applied in water analysis due to its high sensitivity and the possibility of direct bacterial quantification. Different culture media are used for the enumeration of these bacteria, depending on the type of matrix and the bacterial group to be identified.
Most Probable Number (MPN) technique: The MPN is a microbiological method used to estimate the concentration of bacteria in a sample. The procedure consists of inoculating decreasing volumes of the sample into a series of tubes containing appropriate selective media. Based on the results obtained, the bacterial concentration is determined using standardized statistical tables available in technical standards.
Presence/Absence (P/A) test: This is a qualitative method that indicates only whether coliforms are present or absent in a given sample volume. The sample is inoculated into a selective medium that allows the growth of coliforms, usually with visual indication of positivity through turbidity or color change.
Enzyme substrate method: This method is frequently used for drinking water analysis. It is based on the detection of specific enzymes produced by bacteria: β-galactosidase, which indicates total coliforms, and β-glucuronidase, which indicates Escherichia coli. The substrate reaction results in a color change and/or fluorescence under UV light, allowing the identification of the microorganisms.
Author:
Thaynara Morgana Marin - Technical Manager at Freitag Laboratórios
